Karpas-299人間變性大細胞淋巴瘤細胞

                                                                                Karpas-299人間變性大細胞淋巴瘤細胞
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細胞名稱：Karpas-299人間變性大細胞淋巴瘤細胞

品牌：上海研尊生物
貨期：現(xiàn)貨
細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

種屬來源：人
性別年齡：男性，25歲
組織來源：外周血
生長特性：懸浮生長
細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣細胞規(guī)格：1X106cells/T25或1mL凍存管
培養(yǎng)條件：RPMl 1640+2mM Glutamine +20%fetal bovine serum+1%P/S37℃, 5% CO2
凍存條件：90%FBS+10%DMSO
傳代方法：1：3傳代，2-3天傳1代

細胞培養(yǎng)操作
干冰運輸：收到細胞后需立即轉(zhuǎn)入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復(fù)蘇
常溫運輸：收到細胞后，請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代
細胞傳代：細胞密度達80% - 90%，即可進行傳代培養(yǎng)
培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟
 對于貼壁培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細胞的脫落。
1.收到細胞后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因為運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2.對于貼壁細胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基，至剩余5-8mL 左右，隨后根據(jù)培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代。
3.對于懸浮的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管，150 g 離心 5 分鐘，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存管細胞操作步驟
注意： 為保證細胞的高活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約1分鐘。
2.一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完培養(yǎng)基的離心管中，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。
4.用完培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5.將細胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細胞傳代培養(yǎng)
1.吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS潤洗一次。
2.加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3-5分鐘。
3.加入2mL完培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓毎麖呐囵B(yǎng)瓶表面吹落，并使細胞分散。
4.將細胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
懸浮細胞傳代可參考以下方法：
一、直接傳代法
1.待懸浮細胞長滿至 80%～90%（細胞懸液變黃），即可傳代；
2.用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3；
3.加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
 二、離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細胞碎片的情況下）
1.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；
2.150 g 離心 5 min，棄去上層清液；
3.使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞；
4.吸管吸取適量細胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞凍存操作
1.1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1 x 106/mL，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識；
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存

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